大鲵规模化繁殖新技术

　　大鲵俗称娃娃鱼，是国家二类保护水生野生动物，是农业产业化和特色农业重点开发品种；是野生动物基因保护品种。二十多年来，娃娃鱼尚未实现规模化繁殖。对此，运用现代分子生物学、基因学等新技术，创新娃娃鱼繁殖技术，实现了娃娃鱼规模化繁殖，这对保护、增殖其资源提供了一个技术平台。 
　　1.仿生态环境
　　仿生态环境条件优劣，关系到亲体培育性腺发育是否成熟。仿生态环境主要包括仿生态亲体培育池、人工控温、人工控光、人工调节水质等。
　　1.1 人工控温 水温是娃娃鱼性腺发育的决定因素。亲体培育首要工作是将水温调控在其性腺发育所需最佳范围18℃～23℃。亲体性腺发育具有明显的季节性周期，即每年3～9月。针对这一季节性周期，春季因亲体池水温偏低，故将水温升高到18℃～23℃；使亲体早开口摄食。以丰富的营养满足其性腺发育。夏季又因水温较高，不利于亲体生长发育，故要将水温降到18℃～23℃。水温日变幅不要超过±1.5℃。
　　1.2 光照调节 娃娃鱼喜暗、怕光有背光运动的习性。光照在娃娃鱼性腺发育及产卵、受精的生命过程中发挥重要作用。强光照抑制亲体性腺发育成熟和产卵、排精。暗光却促进亲体性腺发育成熟。实验研究结果表明：在强光条件下亲体性腺发育ⅲ期至ⅳ期初时，大部分精卵巢退化。因此，亲体培育光照严格控制在300～500lx。也就是完全暗光。
　　1.3 水质调节 亲体池水要求：矿化度高、硬度大、透明度大，ph6.5～7.5。良好的水质是亲体培育的重要生态因子。广东、湖南、浙江、四川、湖北、河南、江苏等省这几年来，娃娃鱼人工繁殖产苗率低的一个重要因素是水质不佳（有的地方是用深井水，有的地方是用严重污染的河水过滤后培育亲体）。水质调节主要工作是勤换水、勤排污、定期冲洗池底，定期用活菌净水剂调节水质。最好的办法是将亲体池建在石灰岩山溪间。
　　2 亲体培育
　　2.1 营养与饲料 营养丰富的饲料是亲体性腺发育的物质基础。亲体培育期间，饲料中蛋白质含量为42%～45.8%，糖为10%～12%，脂肪为2%～3%，维生素、矿物质为1.5%，中药促性成熟添加剂2%～3%，其他7%～18%。饲料蛋白质中的氨基酸平衡极为重要，不容忽视。亲体培育期间，要依据它的性腺发育不同时期，投喂含量不同的中药促进性腺发育的人工配合饲料。投喂中药配合饲料及投喂含有促进生殖细胞发育及dna的合成添加物是亲体培育的关键技术之一。
　　2.2 亲体放养 娃娃鱼亲体放养主要有两种方式：一种是雌、雄混养、一种是雌、雄单独养。
　　2.3 亲体培育 娃娃鱼亲体培育技术是实现规模化繁殖的关键所在。娃娃鱼规模化繁殖的重要前提是要培育出大量性成熟亲体；特别是要有较多的性成熟的雄性亲体。
　　娃娃鱼性腺发育具有季节性周期，即每年3～4月开始发育；7～10月成熟。根据这一季节性周期。人工培育亲体主要采用：冬季、春季、产前及生理学方法。
　　2.3.1 冬季培育 冬季培育是指亲体产后体虚阶段。这一阶段亲体培育的目的是给娃娃鱼补充大量营养物质；使亲体产后迅速恢复健康。冬季培育主要工作是调控水温和投饵。水温调控分两个阶段，首先是将水温控制在18℃～22℃，使亲体大量摄食，储备充足营养越冬；然后是将水温降至10℃以下，使亲体进入冬眠。冬眠能使亲体翌年性腺发育。冬季饵料投喂是以人工配合饲料为主，在配合饲料中还要添加0.5%的赖氨酸和0.5%的维生素。
　　2.3.2 春季培育 春季培育主要工作是调控水温、调节光照，调节水质及投饵。调控水温是指春季亲体培育池水温偏低，所以用升温的方法将水温升到18℃～23℃，从而使亲体早摄食，以便有丰富的营养满足它的性腺发育。调节光照是指将亲体池光照严格控制在500lx左右，即黑暗光线下培育亲体。调节水质是指调节好亲体池水质，使池水矿化程度高、硬度大、透明，保持清新。投饵则是投喂促进亲体性成熟的中药配合饲料和投喂促进亲体生殖细胞dna合成的添加物。投喂饵料要求鲜、新、质优、无公害。适当控制投喂量。
　　2.3.3 产前培育 产前是亲体性腺发育成熟的重要时期，因此，产前培育主要采用生态学和生理学相结合的方法进行强化培育。
　　生态学方法：野生娃娃鱼是在深山峡谷溪河、阴河有回流水和冒泉水的地方繁衍生息。因此，人工培育亲体，首先是要建造一个仿生态池。同时在产前培育阶段，要将水温控制在18～20℃。由于产前培育是夏季，自然水温较高，所以降温办法是用空调，虽然用空调降温可以达到产前培育目的，但存在着空调费用大及水温波动而影响亲体性腺的不利因素。最佳可靠的办法就是在山区打一个隧道建亲体培育池。这样就是自然降温，并且水温稳定，有利于亲体性成熟。城市可以在人防工程内建亲体池，也是自然降温。但存在一个问题是水源不是天然水。调节光照是指将亲体池光照控制在暗光条件下。也就是光照强度为300～500lx。冲水是产前培育的一环，每天冲水2次、每次0.5h。
　　生理学办法：主要是将促进亲体性成熟的中药制剂注射到亲体体内，从而提高了亲体性成熟率。其次是投喂促性成熟的中药配合饲料及促进亲体生殖细胞基因合成的活性饵料。娃娃鱼体内，联结神经系统与性腺的垂体是生殖细胞发育成熟的重要器官。中药生精注射液的药理、药效研究结果显示它能促进娃娃鱼脑垂体释放激素，提高了血清中gth的含量；从而提高了亲体性成熟。
　　3 人工繁殖
　　3.1 亲体选择 亲体选择直接影响催产率的高低。由于亲体性成熟特征不明显，因此，人工选择亲体时，往往选不好性成熟亲体，造成催产失败。我们采用经验选择与b超检查相结合的方法，提高了选择性成熟亲体的机率。
　　雄性亲体性成熟特征：泄殖孔隆起圈上小白点明显突出，内周边有充血现象。
　　b超检查：精巢长6～9cm、宽为0.8～2.6cm。声像图显示：精巢外形饱满、中间无沟，表明性成熟。
　　雌性亲体性成熟特征：泄殖孔充血，腹部膨大柔软和富有弹性感。
　　b超检查：卵径5～7cm；声像图显示：卵巢中卵泡增大，卵呈单个链珠，表明性成熟。
　　3.2 人工催产 ①催产剂：lrh-a、hcg；②催产剂量（按新标准执行）；雌性：lrh-a0.2～150μg/kg＋hcgl0～15001u/kg。雄性：上述剂量减半；③催产方法：亲体催产注射部位均为背部肋间，进针0.5cm；④催产效应：亲体催产后，产卵效应时间为4～11d。其中最佳时间是4～6d；⑤人工授精。
　　娃娃鱼人工授精采用干湿法，其操作步骤是：首先当发现雌体产出卵膜后、一人立即用手轻托卵带放入搪瓷盆中；另一人则将成熟好的雄性亲体捉起来放入活动布担架中。然后一人用手轻挤雄性后腹，见泄殖孔有乳白色精液时，另一人用干净瓷碗在泄殖孔接流出的精液，加入精子营养液。最后将精液倒入卵带盆中；轻晃卵带盆，使卵受精均匀。15min后加入干净水；静置20min后，将卵带盆的水换两次。接着把卵带放入塑料篮中悬浮于孵化池中，即进入孵化期。
　　3.3 人工孵化
　　3.3.1 孵化的生态环境 水源可用自来水、山溪水、泉水。泉水孵化时，先要将泉水抽入蓄水池磁化后，加温放入孵化池。否则用泉水特别易感染水霉。水温对孵化影响很大。水温21℃～23℃，孵化时间为28～30d；水温18℃～20℃，孵化时间为35山水温16℃～18℃，孵化时间为40～45d。孵化水温日变幅不要超过±1.5℃。孵化水温过高易造成胚胎死亡或是造成畸形苗。所以孵化期间水温最佳范围是20℃～22℃。受精卵对水的含氧量要求不低于5mg/l。受精卵必须是在暗光条件下孵化。光照要求严格控制在300～500lx范围内。
　　3.3.2 人工孵化 受精卵采用静水流水两种方法孵化。静水孵化时，早晚各换水一次。泉水流水孵化时，先要将泉水升温，然后才能流入孵化池。因为低温泉水孵化易使受精卵感染水霉。无论是静水孵化，还是流水孵化，都要定期用水霉净消毒。以免胚胎受水霉侵害。
　　孵化期间注意几点事项：一是每天控制好水温和光照。水温控制在20℃～22℃。光照控制在300～500lx内；二是防治水霉，由于孵化期水温低，且是用泉水孵化。因此，定期用水霉净预防是防治水霉有效措施；三是防止胚胎“贴壳”，即定期轻翻受精卵。
　　4 小结
　　娃娃鱼规模化繁殖技术关键因素是：一是要建造一个仿娃娃鱼在自然界栖息场所的生态池及用原产地的天然水。近20年来从娃娃鱼人工繁殖出苗低的情况来分析，有的地方是用深井水，有的地方是用污染严重的河水过滤后作为水源，这是娃娃鱼繁殖出苗低的一个重要原因。可见娃娃鱼繁殖基地最好是建在原产地；二是要培育出大量性成熟亲体。由于娃娃鱼性成熟率一般只有26.2%，并且在这26.2%里面还有雄性精液质量差及雌、雄性腺发育不同步，所以娃娃鱼繁殖至今未实现规模化，即苗种大量生产。我们研究雄性性成熟率低的根本原因是精子活力差。它的病因用中医学来讲是属“肾阳虚”，现代医学来讲则是属内分泌功能紊乱。因此，我们研制了中药生精散，有效解决了雄性精子活力差的问题。我们在武汉某公司工作时、由于亲体数量较少，加之培育期短，也未繁殖出幼苗，这是娃娃鱼繁殖不同于四大家鱼和其他特种水生动物繁殖之处。另外要注意的是，要今年繁殖出娃娃鱼苗，亲体必须是头一年10月～12月引进鱼池的。当年引进亲体、当年很难繁殖出鱼苗。这一点应该引起从业人员足够重视；三是选择好性成熟亲体。近几年来，我们在各地繁殖实践中，催产时只注射lrh-a0.2pg/kg＋hcgl01u/kg，娃娃鱼产卵达到93%，受精率达到82.3%，孵化率为56.5%。由此可见娃娃鱼能否实现规模化繁殖，关键技术点、核心技术点就是要人工培育出大量性成熟的亲体。 

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